我们在使用紫外分光光度计的时候,常常提到230、260、280这几个数值,到底他们有什么具体的含义呢?
其实就是3种常见的波长,单位是nm。
230nm,是糖类、盐类和有机溶剂等碳水化合物等最高吸收峰,260nm是DNA和RNA的最高吸收峰,280nm是蛋白质的最高吸收峰。他们的比值可以用来分析样品。如:
260/230的比值低于1.8,代表DNA和RNA样品中存在碳水化合物的污染,理想的值在1.8~2.2之间。
对于DNA样品,260/280的比值应>1.8,RNA则应该>2.0 。比值过低代表样品中存在蛋白质、酚类的污染。
还有其他的因素,如样品缓冲液PH值、离子浓度等也会影响核酸样品的吸光度值。因此,测量时应该使用低离子浓度,在一定的PH范围内进行。校准时使用和洗脱样品同样的溶液。
样品浓度也不能过低,容易受溶液其他颗粒的影响,导致得到的吸光度不准确。
最后,测量的样品应该混合充分、质地均匀无气泡,否则多次检测会出现很大误差。
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